那么这幅惟妙惟肖的最后的晚餐十二门徒是谁呢？整幅画从左往右数，分别是巴塞洛缪、小詹姆斯、安德鲁、彼得、犹大、约翰、耶稣、托马斯、大詹姆斯、菲利普、马修、裘德·蒂德斯和西蒙。其中叛徒就是第五个攥紧小钱袋，脸部极其阴暗的犹大。画中的每个使徒都是达芬奇基于现实生活的人物塑造的，而背叛者犹大据说是达芬奇跑到米兰的监狱去找了一个大骗子，按着他的样子描绘的。
达芬奇成功的进入了每位使徒的内心，每个人都是独一无二的，再把他们组合在一起，真的是一项非常艰难的任务。可以说整幅画完美的表现了一种门徒们听到消息炸开的感觉，12个门徒呈现出了十二种不同的姿态，而达芬奇捕捉了每个人最为生动的一瞬间，与屋内的混乱对比，窗外则是晴空万里，象征着耶稣内心的光明。
