被作为马路大的人包括中国、苏联和其他参战国的爱国分子、抵抗运动成员、被俘战士以及无辜老百姓，其中主要就是中国和苏联人，实验手段包括注射、感染、炸伤、打活人靶等，手段可以说是极为残忍。根据参加实验的日本匪徒回忆，自1941年-1945年间，731部队因实验而杀害的马路大不下于3000人，死后就直接被送往特别火葬炉焚烧。
战争结束二十年后，一位前七三一部队员写下这样一首充满负罪感的诗句：一位画家在画“冻伤试”，他自己的手也在发抖，因为眼看着“马路大”在寒冻中冻掉双手。解剖活人的手术刀也冻得凝结一层血迹，酷热的天哪，锁链声仿佛像人在哭泣。为了同死亡做斗争，越狱的怒火也曾炽烈地燃烧……
